بررسی اثر پروتئین ‏‎14kda‎‏ جدا شده از غضروف کوسه ماهی بر حجم تومور و نسبت ‏‎cd4/cd8‎‏ در سلول های ‏‎til‎‏ موش

مطالعات علمی در مورد استفاده از عضروف کوسه ماهی در درمان بیماری هایی مثل سرطان، قدمتی 40 ساله دارد. نشان داده شده است که این ماده اثر ضدرگزایی و ضدپروتئاز دارد و می تواند با تنظیم ملکول های چسبان سطح سلولها، در اتصال سلولها به هم مداخله نماید. علاوه بر این، غضروف کوسه ماهی دارای اثر مهاری بر تکثیر سل لاین های توموری بوده و متاستاز را نیز مهار می کند. این یافته ها باعث شده است که در حال حاضر سرمایه گذاری وسیعی روی این موضوع صورت گرفته و بعضی از مطالعات تا فاز ‏‎iii‎‏ کلینیکال ترایال پیش رفته اند.در تحقیق حاضر، با توجه به اطلاعات قبلی که پروتئین های با وزن ملکولی 14 و ‏‎15kda‎‏ دارای بیشترین اثرات تنظیم ایمنی هستند، اثر این فراکشن بر سلول های ‏‎til (tumor infiltratign lymphocytes)‎‏در موش مورد بررسی قرار گرفت. در این تحقیق، با ایجاد تغییراتی در روش های قبلی، ابتدا غضروف بطور مستقیم لیوفیلیزه شده و با گوانیدین ‏‎hct‎‏ عصاره گیری شد. این عصاره با روش های مختلف تغلیظ گردید و نشان داده شد که بهترین روش، تغلیظ با ‏‎‏‎%20 peg‎‏ است. سپس، عصاره حاصله به روش کروماتوفوکوزینگ فراکشن گردید. دوباند 14 و ‏‎15kda‎‏، هر دو در یک فراکشن با 3/5‏‎phi=‎‏ از ستون خارج گردیدند. بعد از حذف پلی بافر و آنتی پروتئازها با ستون سفادکس ‏‎g-25‎‏ متعادل شده با ‏‎pbs‎‏، آزمایش ‏‎dth‎‏ انجام گردید، به گروه های جداگانه موش های ‏‎balb/c‎‏ بصورت داخل صفاتی، ‏‎pbs‎‏ و فراکشن عضروف کوسه تزریق شده و بعد از یک ساعت، ‏‎srbc‎‏ بصورت زیر پوستی تجوی گردید، بعد از 5 روز، تزریق یادآور صورت گرفته و میزان التهاب در فواصل زمان مختلف اندازه گیری شد. همچنین، به 50 عدد موش، 10 سلول تومور آدنوکارسینومای موشی تزریق گردید و بعد از القا تومور، به دو دسته تست و کنترل تقسیم شدند. به این موشها، به ترتیب، فراکشن عضروف کوسه و ‏‎pbs‎‏ بصورت داخل صفاتی تزریق گردید و بعد از 5 روز، تومور آنها برداشته شده و سوسپانسیون سلولی حاصله، با آنتی بادی های فلورسنت منوکلونال ضد ‏‎cd4‎‏ و ‏‎dc8‎‏ رنگ آمیزی گردید. سپس، سوسپانسیون های سلولی، با دستگاه فلوسایتومتری مورد ارزیابی قرار گرفتند. نتایج، نشان دادند که فراکشن حاوی پروتئین های 14 و ‏‎15 kda‎‏ دارای اثر تحریکی قوی بر روی واکنش ‏‎dth‎‏ بوده و می تواند انفیلتراسیون لنفوسیت ها به داخل تومور را نیز بشدت افزایش دهد. افزایش انتخابی بیشتر در انفیلتراسیون ‏‎til‎‏های ‏‎cd ‎‏، نشان دهنده اثر تنظیم انتخابی این فراکشن بر ورود لنفوسیت ها به داخل تومور است.